健康网讯:
[摘 要］对泌尿生殖道支原体和衣原体检测的现状进行综述，着重分析目前支原体和衣原体检测中存在的亟待解决的问题。 解脲脲原体（UU）、人型支原体（MH）、生殖支原体（MG）和沙眼衣原体（CT）都是寄生在泌尿生殖道的病原体，常引起泌尿生殖道疾患。支原体和衣原体感染不但是非淋菌性尿道炎（NGU）的最主要病因(90%以上)，且已成为发病率最高的性传播疾病，已越来越受到重视。但由于技术局限，目前对其检测仍存在不少问题亟待解决。笔者结合自己的工作经验，综述并分析泌尿生殖道支原体和衣原体检测的现状和存在问题，以裨于试剂的改进和临床检测方法的提高。1 检测现状 1.1 培养法 支原体可用人工合成培养基培养，由于不具有甾醇合成能力，培养系统应添加含甾醇等长链不饱和脂肪醇丰富的物质，一般采用SP4培养基加马血清。MG生长所需的营养成分复杂，生长极缓慢，一般需2周～3月。CT必须采用细胞培养，一般用McCoy细胞系进行培养，但细胞培养需专业化技术、试剂和设备，要求较高，周期也较长，目前临床一般不采用，仅在科研单位进行科研活动，或作为新诊断试剂方法学评价的金标准。培养法不能快速检测支原体感染，一般UU和MH需2～3天才能出结果。不过随着实验水平提高，市面上已出现一些24 h可出结果的试剂。但MG尚未实现24 h培养出结果，因此临床上不采用培养法检测MG，仅用于科研活动。 目前临床培养法检测UU和MH多采用液体培养基，加样培养变色判断结果。理论上这种变色也可能由于其它微生物代谢而发生，因此要求变色后过滤除菌，再接种到固体培养基上观察菌落。若培养基选用适当抗生素，有效地抑制杂菌生长，单纯液体培养基结果就有相当高的临床可信度。即使有个别变色是杂菌所致，标本病人也有细菌性炎症，采用抗生素也不为过。 1.2 免疫法 采用此法检测的试剂目前临床较常用。一般为间接法（ELISA法或金标法）检测抗体，比较而言金标法检测抗体的试剂用得更多；而用于检测支原体抗原的试剂目前尚未商品化。此类试剂一般采用夹心法检测CT特异性脂多糖抗原(LPS)，影响较大的有金标试剂和免疫荧光试剂。由于免疫反应的特异性和酶催化底物反应的高效性或荧光信号的高敏性，故此类试剂理论上灵敏度和特异性都较高。 1.3 PCR法 此类衣原体试剂有定性和定量（多是PCR酶免试剂）两类，而支原体试剂只有定性一类。PCR反应有较高的灵敏度，对实验条件、试剂以及操作人员的要求都较高，操作不当易造成错误判断，并且PCR定性试剂一般没有药品批准文号，临床上使用应慎重。定量试剂有药品批准文号，但面市不久，尚处于推广中。科研单位使用PCR试剂一般用于鉴定血清型，而医疗单位使用PCR定量试剂多用于临床疗效观察。 1.4 快速生化法 由于支原体生化酶反应速度和特异性都存在问题，目前尚无检测支原体快速生化法试剂，但衣原体已有此方法学试剂。国内开发的生殖道CT生化检测试剂即为此类，它是根据CT侵染上皮细胞后产生的独特的化学结构，配以生化酶试剂与之反应，观察变色与否判断结果。临床观察资料表明，以细胞培养为金标准，此试剂的灵敏度和特异性分别为87%以上和97%以上，加之价格较低，具有良好的应用前景。2 存在问题 2.1 由于支原体在人群中广泛存在，许多正常人也有低滴度抗体水平，单纯根据一次抗体检测结果，很难判断标本病人是既往感染还是现症感染，再次测定支原体抗体滴度增加时方可判为支原体阳性。为此要求检测支原体抗体的应为定量试剂，而目前国内间接法检测支原体抗体的试剂都是定性试剂，且有一定的市场占有率，这就说明了为什么许多病人检测抗体为阳性而培养则为阴性［1］，也在一定程度上影响了病情的确诊。国内有些科研单位正研制间接法检测支原体抗原的试剂［2］，直接检测病原体抗原，因此比检测抗体试剂有更高的特异性和准确性。基于支原体抗体定性检测试剂的可靠性存在问题，在检测支原体抗体定量试剂和支原体抗原试剂商品化之前，宜采用液体培养法。 2.2 MG诊断问题 以往资料显示MG感染率不超过5%，鉴于培养周期长，有关研究又不多，临床一般不检测MG。但有资料表明MG的阳性率并不低（14.1%）［3］，以前资料的低感染率可能是试剂的灵敏度偏低所致。因此进一步开展MG的研究，开发临床适用的试剂，应是当前工作重点之一。 2.3 支原体计数的可靠性问题 目前国内市场上销售的支原体药敏试剂，一般都带支原体计数，计数的前提必须是标本采集量的标准化，若标本采集量不标准，计数就是空谈。血清标本比较容易定量采集，而支原体测定所取的标本是分泌物或中段尿，则不容易定量采集。 对于分泌物来讲，采集标本量时多时少，如果这次取的分泌物少，而分泌物中支原体数量≥104，采用所谓的可计数的试剂检测可能会得到支原体数量<104的结果；同样中段尿是一个定性且很泛的概念，每次不可能取到相同位置的中段尿，也不可能标准化。既然取样不能标准化，计数就不科学，可能给临床治疗工作带来误导。市面上的试剂带计数功能的可能原因：①厂家没有意识到标本采集量的标准化问题；②故弄噱头和跟风。衣原体PCR定量试剂也是测分泌物，存在同样问题。 2.4 发病率高而阳性率低的问题 随着与国际接轨，发病率可比性会增加。西方国家NGU中UU阳性率一般为40%～60%（含多重感染，下同），MH阳性率一般为20%～50%，CT阳性率一般为25%～55%［4～6］。而纵观近十年国内临床资料，UU阳性率一般为20%～30%，MH阳性率一般为10%～20%，CT阳性率一般为16.2%～27.0%［7］，国内明显比国外低，临床实际的阳性率更低，究其原因，可做以下分析。 支原体试剂灵敏度偏低的原因：①没有充分考虑支原体生长增殖所需的最佳条件；②仅考虑其它微生物存在造成的假阳性而没考虑某些微生物存在会抑制支原体的生长繁殖；③为了对UU和MH鉴别，培养基一般添加野株天然耐药的抗生素，但临床株可能在进化过程中突变而对这种抗生素敏感，导致假阴性的结果。我们在临床工作中发现一种支原体试剂，性病门诊UU阳性率为60.65%，MH阳性率为23.26%，与国外资料比较符合，并且与国内程文献报道（58.97%）接近［8］，与此对比国内另一种同类试剂UU阳性率为22.17%，MH阳性率为9.35%。有些正常人通过液体培养基培养可能判为阳性，这些人虽无任何症状，但其作为支原体携带者可看作泌尿生殖道炎症性疾病的危险人群，临床上也应予以高度重视。 衣原体试剂阳性率低的原因更多，除去实验操作影响，① 衣原体是寄生在上皮细胞内，采样若没采到上皮细胞，势必造成假阴性；② 抗原提取不彻底（只有破坏衣原体细胞壁，其LPS才溶出），或抗原被破坏（LPS 82℃分解破坏），也可造成假阴性；③试剂盒生产所用的单抗相应的衣原体血清型可能存在地区差异或变异，因为在临床工作中我们发现，某同一批号衣原体试剂在有些地区（并不一定是性病高发区）的阳性率比较接近厂家标示的水平，而在另外一些地区（有些还是性病高发区）的阳性率则远远低于厂家标示的水平；④ 试剂本身灵敏度低。［参 考 文 献］［1］ 杨玉英，张学宁，沈秀芬，等.生殖道支原体感染三种检测方法的比较［J］.陕西医学检验，2001，16（1）：37-38.［2］ 李洪星，赵季文，徐萃瑜，等.LEIA检测人型支原体抗原方法的研究［J］.南京铁道医学院学报，1995，14（2）：86-88.［3］ 王荷英，施美琴，叶顺章，等.非淋菌性尿道炎的生殖支原体检测［J］.中华皮肤科杂志，1998，31（3）：149-151.［4］ Faro S.Chlamydia trachomatis:female pelvic infection［J］.Am J Obstet Gynecol，1991，164:1767.［5］ McGregor JA,French JI.Chlamydia Trachomatis infection during pregnancy［J］.Am J ObstetGynecol,1991，164:1782［6］ Hillis SD,Nakashima A,Marchbanks PA,et al.Risk factors for recurrent Chlamydia Trachomatis infections in women［J］.Am J Obstet Gynecol,1994，170:801.［7］ 叶顺章，宦秉瑜，钟镜增，等.我国部分地区性病高危人群生殖道衣原体感染和HIV抗体的调查［J］.中华皮肤科杂志，1993，26（4）：201-203.［8］ 程文海，谢礼豪，卢和琨，等.女性非特异性生殖道感染中段尿和阴道拭子培养解脲支原体［J］.中国皮肤性病学杂志，1999，13（5）：288-289.［作者单位］郑州博赛生物工程有限责任公司,河南 郑州 450001［作者简介］王则宇（1972-），男，河南省平舆人，工程师，理学学士，主要从事微生物快速检测和药敏鉴定的研究。 中国皮肤性病学杂志
